【小配方】2、电泳缓冲液、染料和凝胶加样液配制方法

日期时间：2016-01-30     文章来源：本站     点击量：3060

1、10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）：

    小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到溶解，分装成小份4℃避光保存。

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2、电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水	242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L

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3、5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水	54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L

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4、6×DNA Loading buffer蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖 水	1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml

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5、10×DNA Loading buffer(终止反应)十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油 水	20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 补足到10ml

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6、30％（W/V）Acrylamide

组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％
配制量 1L
配置方法 ：

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Acrylamide         290g

BIS                10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

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7、40％（W/V）Acrylamide

组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％
配制量 1L
配置方法

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
Acrylamide     380g
BIS            20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

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8、10％（W/V）过硫酸铵

组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵 
配制量      10mL 
配置方法

1.称取1g过硫酸铵。 
2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。 
3.贮存于4℃。 
注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右， 超过期限会失去催化作用。

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9、考马斯亮蓝R-250染色液

组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇， 10％（V/V）冰醋酸 
配制量      1L 
配置方法

1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。 
2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。 
4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。 
5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。

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10、考马斯亮蓝染色脱色液

组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇 
配制量 1L 
配置方法

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 
醋酸     100mL 
乙醇     50mL 
dH2O     850mL 
2.充分混合后使用。

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11、显影液

组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛(SDS-PAGE银氨染色用)          

配制量 1L 
配置方法

1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。 
柠檬酸 50mg 
甲醛 0.2mL 
2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。 
3.室温保存。

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12、5×Tris-GlycineBuffer           

组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS 
（SDS-PAGE电泳缓冲液）       

配制量       1L 
配置方法

1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 
Tris           15.1g 
Glycine        94g 
SDS            5.0g 
2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。 
3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。