本试剂盒采用改进的CTAB抽提液能高效裂解细胞并灭活细胞内核酸酶，经过氯仿抽提后，真菌基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于纤维素膜上，再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤，进一步将蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度基因组DNA从纤维素膜上洗脱下来。我公司采用进口吸附柱，能高效、专一的吸附DNA。使用本试剂盒提取的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。

【提取步骤】

1.     取适量真菌组织（新鲜组织 100 mg 或干重组织 50 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。转移细粉到一个 2.0ml 离心管，不要解冻，加入 800μl 65℃预热的裂解液FPL，剧烈涡旋振荡充分混匀。

v  如果没有液氮，可以将组织剪成细块，加入800μl 裂解液FPL后迅速研磨，直至无可见块状物，将研磨器中溶液和组织转移到一个 2.0ml 离心管中，剧烈涡旋振荡充分混匀。如果依然有大量难以裂解的团块，应该离心去除，取上清再继续以下操作。

2.     向溶液中加入约5μl RNase A (10 mg/ml)，充分混匀室温静置3分钟。

3.     65℃水浴 10-60 分钟, 在水浴过程中颠倒离心管以混合样品2-3次。

v  水浴时间视组织材料而定，新鲜组织65℃水浴 10分钟即可，其余难裂解的组织可以适当延时。

4.     加入 800μl氯仿/异戊醇（体积比 24：1）（自备），短暂涡旋振荡充分混匀，12,000rpm 离心10分钟。

v  振荡幅度过大，时间过长都会打断基因组DNA，造成DNA纯度和产量降低。

5.     小心吸取上清到一个新的 1.5ml 离心管, 注意不要吸到界面物质，宁缺毋滥。

6.     估算上清量, 加入1/4体积的异丙醇, 立即颠倒混匀数次。

v  此步骤中充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量。

7.     将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱 C 中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 离心60 秒，倒掉收集管中的废液。

8.     加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

9.     加入400μl 漂洗液WB, 12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

10.  将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心60秒，尽量除去漂洗液。

v  漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。也可以将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

11.  小心取出吸附柱 ，放入一个灭菌的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50μl 洗脱缓冲液EB或者TE（洗脱缓冲液事先在60-70℃水浴中加热效果更好），室温放置 2 分钟，12,000rpm离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，再离心1分钟。

v  洗脱体积越大, 洗脱效率越高。如果需要DNA浓度较高, 可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不少于 30μl。

v  本试剂盒提供两种洗脱液EB和TE。EB（10mM Tris-HCl ，pH8.0），不含EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。如DNA需长期保存，可以用TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0）洗脱，EDTA可能影响下游酶切反应。