One Step RT-PCR Kit专为以RNA为模板的终点法PCR检测而设计。使用基因特异引物(GSP)，RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，不需要额外的开管、移液操作，大大简化了步骤，提高了检测通量，并降低了污染的风险。

整合Super M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase以及HotStart Taq DNA Polymerase的优越性能，配合经过优化的缓冲体系，One Step RT-PCR Kit的检测灵敏度可达到1pg总RNA。Super M-MLV（H-）是在M-MLV (H-) Reverse Transcriptase序列基础之上经过多点突变得到的高效逆转录酶，能够增强与模板的亲和力，可获得更多全长的cDNA，并可检测到低至1 pg的总RNA；HotStart Taq  DNA  Polymerase是经过化学修饰的Taq DNA Polymerase，常温下封闭Taq酶的活性，可以非常有效地抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。

注：5× One Step RT-PCR Mix包含优化的缓冲体系和dNTP；One Step RT-PCR Enzyme Mix包含比例优化的Super M-MLV、RNase inhibitor以及HotStart Taq DNA Polymerase。5XPCR Enhancer可以显著增强PCR产物的特异性和产量。

【质量控制】       

1. 所有组分经检测均无核酸外切酶，核酸内切酶，RNase残留。

2. 功能检测1：以1 μl HeLa cell total RNA为模板，以特异引物进行One Step RT-PCR扩增UTRN基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见8.3kb目的条带。

3. 功能检测2：以1 pg HeLa cell total RNA为模板，以特异引物进行One Step RT-PCR扩增GAPDH基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的493bp条带。

【注意事项】

● 所有操作最好在冰上进行。使用无Rnase的离心管、枪头和H2O。高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。

● 一般情况下，建议50℃合成cDNA，对于具有复杂二级结构或高GC含量的模板，可将cDNA合成温度提高至55℃。

● Enzyme Mix已包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量RNase。

● 5×One Step RT-PCR Buffer包含优化的缓冲体系和dNTP，无需再添加dNTP。-20 ℃冻存溶解后如果有不溶物，请室温或者37℃放置10分钟溶解后混匀使用。

● 本制品提供5XPCR Enhancer，在绝大部分RT-PCR反应体系中，5XPCR Enhancer都可以显著增强PCR产物的特异性和产量，只有在极少数的RT-PCR反应体系中，5XPCR Enhancer会抑制反应。

● One Step RT-PCR是针对基因特异引物设计，对于通用引物如oligo(dT)不适用。建议RT-PCR反应时，上下游引物（Primer F/R）终浓度在0.6μM左右调整。