Super M-MLV(H-)Reverse Transcriptase 是在M-MLV (H-) Reverse Transcriptase序列基础之上经过多点突变得到的高效逆转录酶。相对于M-MLV (H-) Reverse Transcriptase,Super M-MLV(H-)在50℃下活性较高,配合本公司优化的5X RT Buffer可耐受高达60℃的反应温度,可用于复杂二级结构的RNA模板的逆转录。Super M-MLV(H-)能够增强与模板的亲和力,可获得更多全长的cDNA,并可检测到低至1 pg的总RNA,特别适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。此外,Super M-MLV(H-)的错配率也比M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase有所降低,提高了克隆的保真度。
【应用范围】
l 常规RT
l cDNA文库构建中第一链的合成,最高可以合成12kb的单链cDNA。
l 引物延伸
l 3’或者5’ RACE
【单位定义】
200U/µl, 在37°C,10min内催化1nmol 的脱氧核苷酸转变成酸不溶性物质所需要的酶的量定义为一个酶单位。
【质量控制】
l 核酸外切酶残留检测:200 U的本酶和0.6 μg λ-Hind III在37℃下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
l 核酸内切酶残留检测:200 U的本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
l RNase残留检测:200 U的本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA在37℃下孵育1小时,RNA电泳谱带不发生变化。
l 功能检测1:逆转录体系中加入200 U本酶,以1 μg Hela cell total RNA为模板,Oligo (dT)18为引物,42℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增DNCH基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的3.2 kb条带。