【小配方】1、分子生物学常用贮液与溶液

日期时间：2016-01-30     文章来源：本站     点击量：3142

1、1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

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2、1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

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3、10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

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4、10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

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5、8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

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6、3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

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7、0.5mol/L EDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

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8、1mol/L HCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

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9、25mg/ml IPTG：

溶解250mg的IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

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10、100mmol/L PMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

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11、20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

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12、10mg/ml Rnase A（无DNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

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13、10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

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14、100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

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15、2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

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16、10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

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17、2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

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18、DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水：

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

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19、甲酰胺（deionized formamide）：

直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

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20、苯酚/氯仿/异戊醇：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

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21、PBS Buffer：

组份:137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4

配置方法(1L):

1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl                8 g 

KCl                0.2g 

Na2HPO4          1.42 g 

KH2PO4            0.27g

2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

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22、磷酸缓冲液（phosphate buffer）：

按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠（ml）	1mol/L 磷酸氢二钠（ml）	最终pH值
77 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280	123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720	6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2

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23、Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）：

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）	pH
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76	9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2

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24、TE（用于溶解和贮存DNA）

成分及终浓度	配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水	1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml